UBO - Université de Bretagne Occidentale
 
Matériels & Méthodes

Vous trouverez ici les descriptions des appareils à insérer dans vos publications.

 

Entête de publication :


Service Commun de recherche de Résonance Magnétique Nucléaire et de Résonance Paramagnétique Electronique de L'Université de Bretagne Occidentale, 6 Avenue le Gorgeu CS93837 BREST Cédex 3


Spectres HRMAS

 

Au cours de l’étude de HRMAS (High Resolution Magic Angle Spinning), l’échantillon est placé dans un rotor tournant autour d’un axe orienté à l’angle magique soit 54.7° par rapport au champ magnétique B0. Le résultat est un spectre dont la résolution avoisine celle d’un échantillon liquide et il est ainsi possible d’analyser les métabolites de faible poids moléculaire en solution dans les liquides intracellulaires d’un tissu vivant.
Toutes les acquisitions ont été réalisées sur un spectromètre BRUKER DRX 500 équipé d’une sonde inverse HRMAS 1H/13C/15N.
Environ 5 mg de …. ont été placés dans un rotor cylindrique de 4 mm d’oxyde de zirconium ZrO2 avec 30 uL de D2O, à la vitesse de rotation de 5000 Hz. Les spectres ont été enregistrés avec un angle d’impulsion de 30°, un délai de 2 s entre chaque scan et une présaturation du signal résiduel de l’eau grâce aux séquences standard de Bruker. La température a été contrôlée à 30°C.

 

All HR-MAS NMR spectra were acquired on a DRX 500 spectrometer (Bruker BioSpin, Wissembourg, France) equipped with an indirect HR-MAS 1H/31P probehead with gradient Z at 25°C. A typical proton 1H HR-MAS NMR spectrum consisted of 64 scans was performed with presaturation of the water peak. Each spectrum was phased and baseline-corrected using a polynomial function. We used around 5mg of …. that was placed in a 4 mm zirconium oxide (ZrO2) MAS rotor. Approximately 30 uL of D2O was added into the rotor with the algal sample for 2H field locking. The sample was placed in a rotor spinning around an axis, which is oriented at the so-called “magic angle” of 54°7 with respect to the magnetic field B0. Best homogenization was obtained at a spinning rate of 5000 Hz. This resulted in a high-resolution NMR spectrum approaching the ones obtained with liquid samples, making spectra analysis possible. The spectra were performed with a 30° pulse, with a 2 s delay and a presaturation of the H2O signal. The temperature was controlled at 25°C.


Spectres haute résolution

 

500MHz

 

Les spectres 1D 1H NMR ont été enregistrés à 25°C sur un spectromètre BRUKER DRX 500 équipé d’une sonde inverse triple résonance 5mm TBI 1H/{BB}/13C. Les analyses RMN ont été enregistrées sur des échantillons dissous dans 700uL de D2O à 100%, selon les programmes d’acquisitions standards de Bruker. Les spectres ont été réalisés avec des délais de 2s entre chaque scan et un angle de 30° d’impulsion sur 16, 64 ou 128 scans selon la concentration de l’échantillon. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au TSP comme référence externe.
Des études en deux dimensions comme des COSY DQF (Double-quantum filtered 1H-1H correlated spectroscopy), des HMQC 1H-13C (Heteronuclear multiple quantum coherence 1H-13C (HMQC), HMBC 1H-13C (Heteronuclear multiple bond coherence 1H-13C) ont été réalisées afin d’attribuer les résonances 1H et 13C de tous les signaux.
Par exemple, pour une séquence HMQC, la matrice consiste en 48 fid de 1024 (F2) *128(F1) points chacun complétés de zéros jusqu’à 1K en dimension F1 lors de la transformée de Fourier, avec une fenêtre spectrale d’acquisition de 2948.113 and 25000 Hz respectivement en dimensions F1 et F2.

 

One dimensional 1H NMR spectra were recorded at 25°C on a BRUKER DRX 500 spectrometer equipped with an indirect 5mm triple resonance probehead TBI 1H/ {BB} /13C. NMR analyses were performed on samples dissolved in 700uL of D2O 100%. The spectra were performed according BRUKER’s pulse programs with standard pulses sequences of 2 s of delay, a 30° pulse and 64 scans. Chemical shifts were expressed in ppm relative to TMS as external reference.
Double-quantum filtered 1H-1H correlated spectroscopy (DQF COSY), Heteronuclear multiple quantum coherence 1H-13C (HMQC), Heteronuclear multiple bond coherence 1H-13C (HMBC) with a delay of 60 ms were performed according to standard pulse sequences to assign 1H and 13C resonances.
For example, in an HMQC experiment the raw data set consisted of …fid of 1024 (F2) * 128 (F1) complex data points each zerofilled to 1k in the F1 dimension prior to Fourier transform with a spectral width of …….. and …….Hz in the F1 and F2 dimensions respectively.

 

500MHz – cryosonde

 

Les spectres RMN 1H et 2D ont été enregistrés sur un spectromètre BRUKER Avance 500 équipé d’une cryosonde inverse 5 mm TCI triple résonance 1H/13C/15N à la température ambiante. Les séquences COSY, HMQC 1H-13C et HMBC 1H-13C ont été réalisées selon les programmes de séquences BRUKER afin de déterminer les déplacements chimiques en 1H et en 13C. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm par rapport au TMS pour le CDCl3 et par rapport au TSP pour les solutions aqueuses.


400 MHz

 

One dimensional NMR spectra were recorded at 25°C on a BRUKER Avance 400 spectrometer equipped with a 5mm triple resonance probehead TBI 1H/{BB}/31P. NMR spectra were obtained at 400.080 MHz (1H), 100.600 MHz (13C) and 161.955 MHz (31P) using CDCl3, DMSO-d6 or acetone-d6 as solvent. Chemical shifts are reported in ppm units downfield from TMS (0.00 ppm), traces of CHCl3, DMSO-d5H, acetone-d5H being used as internal standard. Coupling constants (J) are in Hz.


300 MHz

 

One dimensional NMR spectra were recorded at 25°C on a Bruker AMX-3 300 spectrometer equipped with a 5mm reasonance probehead Quattro 1H/13C/31P/19F. NMR spectra were obtained at 300.130 MHz (1H), 75.470 MHz (13C) and 121.490 MHz (31P) using CDCl3, DMSO-d6 or acetone-d6 as solvent. Chemical shifts are reported in ppm units downfield from TMS (0.00 ppm), traces of CHCl3, DMSO-d5H, acetone-d5H being used as internal standard. Coupling constants (J) are in Hz.
 

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